ELISA酶聯(lián)免疫吸附實(shí)操作常見問題處理方法【干貨滿滿】
2022-04-08 16:34:54
來源/作者：普拉特澤-生物醫(yī)學(xué)整體課題外包平臺(tái)
ELISA酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)操作過程中的常見問題的處理方法由普拉特澤生物給大家解答與分享，普拉特澤生物表達(dá)檢測(cè)平臺(tái)可承接各種表達(dá)檢測(cè)外包服務(wù)，包括檢測(cè)ELISA、Western Blot、DNA甲基化等實(shí)驗(yàn)外包服務(wù)，本文是我們?cè)谕瓿蓭浊Ю?/span>ELISA實(shí)驗(yàn)后，根據(jù)實(shí)驗(yàn)員操作過程中的常見問題與大家留言咨詢最多的問題進(jìn)行回答與建議，快來學(xué)習(xí)吧！
問題一：ELISA試驗(yàn)出現(xiàn)非常弱的結(jié)果，其可能原因和處理的方法如下：
可能原因1：溫育的時(shí)間或者溫度不夠;
解決方法：校正溫育箱溫度。
可能原因2：顯色反應(yīng)時(shí)間太短;
解決方法：校正定時(shí)鐘準(zhǔn)確定時(shí)。
可能原因3：所用配制緩沖液的蒸餾水有問題:
解決方法：使用新鮮合格的蒸餾水。
可能原因4：加入抗體/酶的稀釋液濃度太低:
解決方法：按照說明書保存試劑盒和準(zhǔn)確配制工作液。校正移液器，吸嘴要配套，裝吸嘴時(shí)要緊密。
可能原因5：酶標(biāo)儀濾光片不正確:
解決方法：檢查酶標(biāo)儀使用的濾光片。
可能原因6：試劑盒沒有充分平衡;
解決方法：試劑室溫平衡至少20分鐘，確保所有試劑已平衡至室溫。
可能原因7：不正確的試劑儲(chǔ)存方式:
解決方法：按照說明書要求保存試劑盒。
問題二：ELISA試驗(yàn)的標(biāo)準(zhǔn)曲線和測(cè)定的重復(fù)性差，原因和處理方法如下：
可能原因1：加樣本及試劑量不準(zhǔn);孔間不一致
解決方法：校正移液器，吸嘴要配套，裝吸嘴時(shí)要緊密；重復(fù)某一樣品時(shí)，加樣時(shí)間盡可能與第一次接近；重復(fù)測(cè)定標(biāo)本，操作條件，人員等應(yīng)盡可能與上次保持一致，以排除這些因素造成的不一致的可能性；樣品稀釋前應(yīng)充分混勻。
可能原因2：加樣過快，孔間發(fā)生污染;
解決方法：重復(fù)測(cè)定標(biāo)本，操作條件、人員等應(yīng)盡可能與上次保持一致，以排除這些因素造成的不一致的可能性;加樣不要過快。
可能原因3：加錯(cuò)樣本;
解決方法：檢查記錄和試劑，是否加錯(cuò)樣本。
可能原因4：加樣本及試劑時(shí)，加在孔壁上部非包被區(qū)
解決方法：加樣槍頭不要貼壁。
可能原因5：不同批號(hào)試劑盒中組分混用;
解決方法:：不同批號(hào)試劑盒中組分不可混用。
可能原因6：溫育時(shí)間、洗板、顯色時(shí)間不一致
解決方法:檢查時(shí)間是否一致。
問題三：ELISA試驗(yàn)結(jié)果白板，而且陽性對(duì)照不顯色，怎么辦?
可能原因1：漏加或者誤加試劑;
解決方法:：檢查試驗(yàn)記錄和剩余試劑。每次加液前均應(yīng)核對(duì)標(biāo)簽。
可能原因2：洗板液配制中出現(xiàn)問題，如量筒不干凈含HRP酶抑制物(疊氨鈉等)
解決方法：使用干凈的器皿，正確配制試劑。
可能原因3：溫育的時(shí)間或溫度不夠;
解決方法:：校正溫育箱溫度。:
可能原因4：標(biāo)準(zhǔn)品失活或者丟失;
解決方法：標(biāo)準(zhǔn)品正確保存、溶解和混勻。
可能原因5：抗體失活或者丟失;
解決方法:：更換抗體或者提高抗體濃度
可能原因6：酶失活或者丟失
檢查方法：把工作濃度的酶再稀釋20-100倍，取5uL加入50ul的顯色底物，終止后顯色是否能達(dá)到10左右，此為酶的粗略估計(jì)。
解決方法：更換酶或者提高酶的濃度。
問題四：ELISA試驗(yàn)結(jié)果空白背景高，怎么處理？
可能原因1：洗板不干凈;
解決方法：充分洗滌，徹底拍干:洗板要防止交叉污染:濃縮洗液準(zhǔn)確配制;吸嘴盡可能一次性使用;加樣或加酶拍板的濾紙應(yīng)棄去不用，不要反復(fù)使用，否則易造成污染。
可能原因2：顯色液變質(zhì)或者試劑過期;
解決方法：檢查試劑盒有效期。
可能原因3：ELISA檢測(cè)試劑稀釋有誤，如加酶的濃度過高:
解決方法：請(qǐng)按說明書所示稀釋倍數(shù)配制:
可能原因4：蒸餾水受酶等污染;
解決方法:：使用新鮮蒸餾水;
可能原因5：試劑混用;
解決方法:：不同批號(hào)試劑勿混用。
可能原因6：培養(yǎng)箱溫度超過37℃或反應(yīng)時(shí)間過長(zhǎng)。
解決方法:：顯色反應(yīng)時(shí)間適當(dāng)縮短。
好啦，那關(guān)于ELISA實(shí)驗(yàn)的全部介紹我們就徹底講完啦，大家要記得溫故而知新哦，關(guān)于ELISA實(shí)驗(yàn)的簡(jiǎn)介、步驟、注意事項(xiàng)、常見問題鏈接奉上~快去學(xué)習(xí)吧！
ELISA酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)——簡(jiǎn)介
ELISA酶聯(lián)免疫吸附——實(shí)驗(yàn)步驟
ELISA酶聯(lián)免疫吸附——注意事項(xiàng)
ELISA酶聯(lián)免疫吸附——常見問題
——關(guān)于我們——
普拉特澤自建3000平米的GMP級(jí)實(shí)驗(yàn)室
擁有七個(gè)大型實(shí)驗(yàn)平臺(tái)、碩博士學(xué)歷技術(shù)團(tuán)隊(duì)100余人
病理實(shí)驗(yàn)平臺(tái)、動(dòng)物實(shí)驗(yàn)平臺(tái)、流式檢測(cè)平臺(tái)、分子檢測(cè)中心、細(xì)胞病毒中心,三大資源庫（細(xì)胞、組織、質(zhì)粒）
秉承“死磕真實(shí)實(shí)驗(yàn)”學(xué)術(shù)精神提供各項(xiàng)優(yōu)質(zhì)實(shí)驗(yàn)服務(wù)
歡迎您交流咨詢
電話：400-691-6686
在線時(shí)間：8:00-24:00
微信關(guān)注公眾號(hào)
湘公網(wǎng)安備