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大家好~今天普拉特澤生物繼續(xù)跟大家一起學(xué)習(xí)腦缺血模型的實(shí)驗(yàn)步驟，上期動(dòng)物實(shí)驗(yàn)平臺分享了實(shí)驗(yàn)研究中最常用的大腦中動(dòng)脈栓塞 (MCAO) 模型造模步驟，本文我們繼續(xù)來學(xué)習(xí)另一種被廣泛用于慢性腦缺血研究的動(dòng)物模型——二血管阻塞慢性腦缺血模型，普拉特澤生物動(dòng)物實(shí)驗(yàn)平臺為廣大實(shí)驗(yàn)人員提供腦缺血造模實(shí)驗(yàn)外包服務(wù)，歡迎咨詢。

二血管阻塞慢性腦缺血模型是結(jié)扎大鼠雙側(cè)頸總動(dòng)脈造成腦血流的下降并能較好模擬慢性缺血所致的病理改變，操作簡單、重復(fù)性好、死亡率低，被廣泛用于慢性腦缺血的研究。該模型可造成脫髓鞘改變、軸突丟失、膠質(zhì)細(xì)胞增生等白質(zhì)損傷的病理改變。二血管阻塞慢性腦缺血模型的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物選擇上和MCAO一樣，由于雌激素對缺血結(jié)果有影響，一般選用雄性大鼠。最常用的動(dòng)物是250~300g的雄性 Wistar大鼠。Sprague-Dawley(SD)大鼠和其他品系的大鼠亦可用于本模型的制作。

二血管阻塞慢性腦缺血模型的制作步驟如下：

1、所有操作均在無菌條件下進(jìn)行。手術(shù)人員應(yīng)戴口罩和無菌手套，穿無菌隔離衣進(jìn)行手術(shù)操作：

（1）動(dòng)物呈仰臥位；

（2）頸部正中切口，暴露氣管和雙側(cè)頸總動(dòng)脈，用眼科鑷分離并挑起頸總動(dòng)脈；

（2）暴露一側(cè)頸總動(dòng)脈，將一根外科絲縫線結(jié)扎頸總動(dòng)脈用同樣的方法分離并結(jié)扎另一側(cè)頸總動(dòng)脈；

2、手術(shù)操作步驟

(1)將大鼠放入麻醉箱中，用含2%異氟醚的70%氧化亞氮和30%氧氣的混合氣體以5L/min的氧氣流速進(jìn)行麻醉誘導(dǎo)，3~5min后，大鼠進(jìn)入麻醉狀態(tài)，之后以1L/min的氧氣流速進(jìn)行維持。

(2)術(shù)前褪毛，聚維酮碘常規(guī)消毒手術(shù)區(qū)域。

(3)為了控制平均動(dòng)脈壓、動(dòng)脈血?dú)饬亢脱呛浚瑧?yīng)同時(shí)行尾動(dòng)脈插管。把2根電極通過小的皮膚切口插入雙側(cè)顳肌，以獲取腦電圖。在整個(gè)實(shí)驗(yàn)中，平均動(dòng)脈血壓和腦電圖的獲取依賴動(dòng)力實(shí)驗(yàn)系統(tǒng)。

(4)通過尾動(dòng)脈抽取動(dòng)脈血，運(yùn)用動(dòng)脈血?dú)怏w分析儀和血漿葡萄糖測定儀，對血?dú)夂脱呛窟M(jìn)行測定。

(5)在缺血前15 min和缺血后15 min對動(dòng)脈血?dú)夂脱呛窟M(jìn)行測定，在整個(gè)實(shí)驗(yàn)過程中血液氣體含量都保持在正常的生理范圍內(nèi)。

(6)在大鼠腹側(cè)頸部皮膚正中線處做一個(gè)切口，小心分離兩側(cè)的頸總動(dòng)脈和周圍組織以及迷走神經(jīng)。

(7)把直腸溫度探測器插入到直腸中監(jiān)測體溫。熱電耦33G溫度探測器植入顳肌，監(jiān)測頭部溫度。在動(dòng)物身體和頭部上方的熱光源的幫助下，身體和頭部溫度在整個(gè)手術(shù)過程中保持在(37±0.2)℃。

(8)當(dāng)所有的準(zhǔn)備工作已經(jīng)完成時(shí)，異氟醚的濃度保持在1%。

(9)在缺血前15min，監(jiān)測血壓中的氣體含量，平均動(dòng)脈血壓、腦電圖、直腸和頭部溫度，并且保持在正常的生理范圍內(nèi)。

(10)將兩側(cè)頸總動(dòng)脈通過外科絲縫線5-0結(jié)扎以誘導(dǎo)腦血流低灌注。

(11)縫合皮膚，結(jié)束麻醉過程。大鼠仍然需要進(jìn)行70%氧化亞氮和30%氧氣的混合氣體輔助呼吸，并且保持顳肌和直腸的溫度在37℃，直到它從麻醉狀態(tài)清醒過來，此過程通常需要30~60min。移除頭部和直腸溫度探測器后，把大鼠放回到其原來的籠子。

(12)密切監(jiān)控大鼠呼吸，直到呼吸恢復(fù)平穩(wěn)。1~2h后，大鼠可以轉(zhuǎn)移至動(dòng)物房，常規(guī)供應(yīng)食物和水。

(13)頸總動(dòng)脈閉塞分步法：為避免腦血流量突然出現(xiàn)相對嚴(yán)重的下降，可按以下步驟逐步閉塞頸總動(dòng)脈。大鼠用異氟醚麻醉，頸腹正中切口。暴露左側(cè)頸總動(dòng)脈，與迷走神經(jīng)輕輕分離，用三條結(jié)扎線(2-0)閉塞。1周后，做一個(gè)新的切口，右頸動(dòng)脈同樣被阻塞。

那二血管阻塞慢性腦缺血模型的造模步驟小編就介紹到這里啦~希望呢能夠給您在造模過程中遇到的問題帶來一定的幫助，如果您對腦缺血模型還有更多的疑問或腦缺血模型外包的需求，歡迎聯(lián)系普拉特澤生物客服人員~我們下期見！

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