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大家好，今天普拉特澤生物跟大家一起學(xué)習(xí)的是冰凍切片實(shí)驗(yàn)的注意事項(xiàng)，冰凍切片是一種在低溫條件下使組織快速冷卻到一定硬度，然后進(jìn)行切片的方法，制作過(guò)程快捷、簡(jiǎn)便，但在實(shí)際的操作過(guò)程中也有很多需要注意的細(xì)節(jié)，普拉特澤生物病理實(shí)驗(yàn)平臺(tái)根據(jù)承接的多例冰凍切片實(shí)驗(yàn)代做特地特地為大家總結(jié)分享其注意事項(xiàng)，希望能幫到大家~

本文從冰凍切片的操作前的制備與切片制作過(guò)程要注意的問(wèn)題兩個(gè)方面詳細(xì)分享~

首先是冰凍切片實(shí)驗(yàn)制備的注意事項(xiàng)：

1、新鮮組織的制備

組織盡可能新鮮、驟冷愈快愈好，才能避免冰晶，常用的驟冷劑有：① CO2氣（－78℃） ② 丙酮干冰冷卻的輕石油醚、乙烷和庚烷（－80℃） ③ 液氮（－190℃）④ 液氮冷卻的丙烷（－19℃）。液氮適用于組織化學(xué)，較安全。缺點(diǎn)：組織塊易發(fā)生龜裂。

2、固定組織的制備

為防止水解酶和其他物質(zhì)的移位、彌散，常用4℃、24小時(shí)的甲醛固定能很好地保存酶類(lèi)。但對(duì)許多脫氫酶和轉(zhuǎn)移酶能滅活。故不宜使用，低溫，冷甲醛短時(shí)間固定（10分鐘左右）固定，可顯示琥珀酸脫氫酶。

電鏡出現(xiàn)后，需要保存細(xì)胞的超微結(jié)構(gòu)，以4%緩沖戊二醛（25%戊二醛16ml；0.1M二甲胂酸（pH7．）84ml；蔗糖8g）固定較好。這些固定液主要用于水解酶，而不適于許多氧化還原酶和轉(zhuǎn)移酶。

3、恒冷箱的溫度

一般在冷凍后10分鐘，到接近冷室溫度時(shí)再切，一般組織在－15～－20℃切片最易成功。每種組織有其合適的切片溫度、刀的溫度和冷室溫度，常見(jiàn)組織適應(yīng)溫度如下：

注：固定組織一般高3-5度

4、切片機(jī)的使用

抗卷板的前緣與刀面須有足夠的距離，使切片平滑通過(guò)?？咕戆迓愿哂诘睹娴淖罡唿c(diǎn)?？蓱{經(jīng)驗(yàn)調(diào)整刀對(duì)組織的角度，一般新刀為20゜。操作程序：先接通電源，調(diào)定恒冷箱溫度，調(diào)整切片刀的角度，調(diào)定切片厚度，標(biāo)本置載臺(tái)致冷達(dá)所需溫度后，將其安放在切片機(jī)推進(jìn)器上。即可切片。恒冷箱視使用情況每周或每月清潔一次冰霜。新刀切片滿(mǎn)意，舊刀用自動(dòng)磨刀機(jī)磨刀較好。如果切片刀與抗卷板的位置，角度合乎要求，又有一把銳利的刀，就能獲得理想的切片。

其次就是制作冰凍切片操作過(guò)程中的注意事項(xiàng)：

1、防卷板及切片刀和持刀架上的板塊應(yīng)保持干凈，需經(jīng)常用毛筆挑除切片殘余和用柔軟的紙張擦。有時(shí)需要每切完一張切片后就用紙擦一次。因?yàn)檫@個(gè)地方是切片通過(guò)和附貼的地方，如果有殘余的包埋劑粘于刀或板上，將會(huì)破壞甚至撕裂切片，便切片不能完整切出。

2、多例多塊組織同時(shí)需做冰凍切片時(shí)，可各自放于不同的支承器上，于冷凍臺(tái)上凍起來(lái)，然后依據(jù)不同的編號(hào)，依序切片，這樣做既不費(fèi)時(shí)也不會(huì)亂。

3、放置組織冰凍前，應(yīng)視組織的形狀及走勢(shì)來(lái)放置，所謂“砍柴看柴勢(shì)”，切片也是如此，如果胡亂放置，就不能收到很好的效果。

4、組織塊不須經(jīng)各種固定液固定，尤其是含水的固定液，在未達(dá)到固定前，更不能使用。臨床快速冰凍切片，不須要預(yù)先固定，一是為了爭(zhēng)取時(shí)間，二是固定了的組織，反而增加了切片的難度。如果使用未完全固定的組織做冰凍切片，就會(huì)出現(xiàn)冰晶。這是因?yàn)楹墓潭ㄒ涸诮M織未經(jīng)固定前，其中的水分也可滲入到組織中去，當(dāng)冰凍發(fā)生時(shí)，這些水分就存留于組織中，形成了冰晶。

5、當(dāng)切片時(shí)，如果發(fā)現(xiàn)冰凍過(guò)度時(shí)，可將冰凍的組織連同支承器取出來(lái)，在室溫停留片刻，再行切片，或者用口中哈氣，或者用大拇指按壓組織塊，以此來(lái)軟化組織，再行切片。另者，調(diào)高冰凍點(diǎn)。

6、用于附貼切片的載玻片，不能存放于冷凍處，于室溫存放即可。因?yàn)楫?dāng)附貼切片時(shí)，從室溫中取出的載玻片與冷凍箱中的切片有一種溫度差，當(dāng)溫度較高的載玻片附貼上溫度較低的切片時(shí)，由于兩種物質(zhì)間溫度的差別，當(dāng)它們碰撞在一起時(shí)，分子彼此間發(fā)生轉(zhuǎn)移而產(chǎn)生了一種吸附力，使切片與載玻片牢固地附貼在一起。如果使用冷藏的載玻片來(lái)附貼切片，由于溫度相同，沒(méi)有發(fā)生上述的現(xiàn)象。

好啦！冰凍切片制作過(guò)程中要注意的問(wèn)題我們就總結(jié)到這里啦，還有更多關(guān)于冰凍切片制作的問(wèn)題和歡迎隨時(shí)留言，如有冰凍切片代做、外包的服務(wù)歡迎隨聯(lián)系哦~

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