ELISA酶聯(lián)免疫吸附實操作常見問題處理方法【干貨滿滿】
2022-04-08 16:34:54
來源/作者：普拉特澤-生物醫(yī)學(xué)整體課題外包平臺
ELISA酶聯(lián)免疫吸附實驗操作過程中的常見問題的處理方法由普拉特澤生物給大家解答與分享，普拉特澤生物表達檢測平臺可承接各種表達檢測外包服務(wù)，包括檢測ELISA、Western Blot、DNA甲基化等實驗外包服務(wù)，本文是我們在完成幾千例ELISA實驗后，根據(jù)實驗員操作過程中的常見問題與大家留言咨詢最多的問題進行回答與建議，快來學(xué)習(xí)吧！
問題一：ELISA試驗出現(xiàn)非常弱的結(jié)果，其可能原因和處理的方法如下：
可能原因1：溫育的時間或者溫度不夠;
解決方法：校正溫育箱溫度。
可能原因2：顯色反應(yīng)時間太短;
解決方法：校正定時鐘準確定時。
可能原因3：所用配制緩沖液的蒸餾水有問題:
解決方法：使用新鮮合格的蒸餾水。
可能原因4：加入抗體/酶的稀釋液濃度太低:
解決方法：按照說明書保存試劑盒和準確配制工作液。校正移液器，吸嘴要配套，裝吸嘴時要緊密。
可能原因5：酶標儀濾光片不正確:
解決方法：檢查酶標儀使用的濾光片。
可能原因6：試劑盒沒有充分平衡;
解決方法：試劑室溫平衡至少20分鐘，確保所有試劑已平衡至室溫。
可能原因7：不正確的試劑儲存方式:
解決方法：按照說明書要求保存試劑盒。
問題二：ELISA試驗的標準曲線和測定的重復(fù)性差，原因和處理方法如下：
可能原因1：加樣本及試劑量不準;孔間不一致
解決方法：校正移液器，吸嘴要配套，裝吸嘴時要緊密；重復(fù)某一樣品時，加樣時間盡可能與第一次接近；重復(fù)測定標本，操作條件，人員等應(yīng)盡可能與上次保持一致，以排除這些因素造成的不一致的可能性；樣品稀釋前應(yīng)充分混勻。
可能原因2：加樣過快，孔間發(fā)生污染;
解決方法：重復(fù)測定標本，操作條件、人員等應(yīng)盡可能與上次保持一致，以排除這些因素造成的不一致的可能性;加樣不要過快。
可能原因3：加錯樣本;
解決方法：檢查記錄和試劑，是否加錯樣本。
可能原因4：加樣本及試劑時，加在孔壁上部非包被區(qū)
解決方法：加樣槍頭不要貼壁。
可能原因5：不同批號試劑盒中組分混用;
解決方法:：不同批號試劑盒中組分不可混用。
可能原因6：溫育時間、洗板、顯色時間不一致
解決方法:檢查時間是否一致。
問題三：ELISA試驗結(jié)果白板，而且陽性對照不顯色，怎么辦?
可能原因1：漏加或者誤加試劑;
解決方法:：檢查試驗記錄和剩余試劑。每次加液前均應(yīng)核對標簽。
可能原因2：洗板液配制中出現(xiàn)問題，如量筒不干凈含HRP酶抑制物(疊氨鈉等)
解決方法：使用干凈的器皿，正確配制試劑。
可能原因3：溫育的時間或溫度不夠;
解決方法:：校正溫育箱溫度。:
可能原因4：標準品失活或者丟失;
解決方法：標準品正確保存、溶解和混勻。
可能原因5：抗體失活或者丟失;
解決方法:：更換抗體或者提高抗體濃度
可能原因6：酶失活或者丟失
檢查方法：把工作濃度的酶再稀釋20-100倍，取5uL加入50ul的顯色底物，終止后顯色是否能達到10左右，此為酶的粗略估計。
解決方法：更換酶或者提高酶的濃度。
問題四：ELISA試驗結(jié)果空白背景高，怎么處理？
可能原因1：洗板不干凈;
解決方法：充分洗滌，徹底拍干:洗板要防止交叉污染:濃縮洗液準確配制;吸嘴盡可能一次性使用;加樣或加酶拍板的濾紙應(yīng)棄去不用，不要反復(fù)使用，否則易造成污染。
可能原因2：顯色液變質(zhì)或者試劑過期;
解決方法：檢查試劑盒有效期。
可能原因3：ELISA檢測試劑稀釋有誤，如加酶的濃度過高:
解決方法：請按說明書所示稀釋倍數(shù)配制:
可能原因4：蒸餾水受酶等污染;
解決方法:：使用新鮮蒸餾水;
可能原因5：試劑混用;
解決方法:：不同批號試劑勿混用。
可能原因6：培養(yǎng)箱溫度超過37℃或反應(yīng)時間過長。
解決方法:：顯色反應(yīng)時間適當縮短。
好啦，那關(guān)于ELISA實驗的全部介紹我們就徹底講完啦，大家要記得溫故而知新哦，關(guān)于ELISA實驗的簡介、步驟、注意事項、常見問題鏈接奉上~快去學(xué)習(xí)吧！
ELISA酶聯(lián)免疫吸附實驗——簡介
ELISA酶聯(lián)免疫吸附——實驗步驟
ELISA酶聯(lián)免疫吸附——注意事項
ELISA酶聯(lián)免疫吸附——常見問題
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