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    膿毒癥（Sepsis）是臨床常見的危重癥，其病理機(jī)制復(fù)雜，涉及全身炎癥反應(yīng)、免疫失衡及多器官功能障礙，構(gòu)建可靠的動物模型是研究膿毒癥發(fā)病機(jī)制和藥物療效的關(guān)鍵~普拉特澤生物動物實(shí)驗(yàn)平臺專業(yè)承接膿毒癥模型、裸鼠成瘤實(shí)驗(yàn)外包、肝纖維化等動物實(shí)驗(yàn)代做服務(wù)，積累專業(yè)豐富的實(shí)驗(yàn)操作經(jīng)驗(yàn)。上期我們分享膿毒癥動物模型實(shí)驗(yàn)常見問題與解決方案大家都說不夠詳細(xì)，實(shí)驗(yàn)過程中操作不當(dāng)、模型選擇錯誤或術(shù)后管理疏漏均可能導(dǎo)致實(shí)驗(yàn)失敗。那今天咱們就為大家專門出一期基于最新研究與實(shí)踐經(jīng)驗(yàn)，總結(jié)膿毒癥動物模型實(shí)驗(yàn)的核心注意事項(xiàng)，幫助科研人員規(guī)避風(fēng)險、提升實(shí)驗(yàn)成功率

一、模型選擇：CLP vs LPS，如何科學(xué)決策？

膿毒癥動物模型主要包括盲腸結(jié)扎穿孔（CLP）模型和脂多糖（LPS）誘導(dǎo)模型，兩者各有優(yōu)劣（表1）：

模型類型 CLP模型 LPS模型 原理 通過結(jié)扎盲腸并穿孔引發(fā)多菌性腹膜炎，模擬臨床膿毒癥病理過程168 腹腔注射LPS（內(nèi)毒素）激活全身炎癥反應(yīng)，操作簡便28 適用研究 多器官功能障礙、免疫失衡、藥物療效評估 急性炎癥反應(yīng)、細(xì)胞因子風(fēng)暴機(jī)制研究 優(yōu)缺點(diǎn) 更貼近臨床，但操作復(fù)雜、死亡率高36 重復(fù)性好、成本低，但難以模擬膿毒癥晚期免疫抑制

選擇建議：

CLP模型：適用于需要模擬臨床多菌性感染及器官衰竭的研究，需重點(diǎn)關(guān)注結(jié)扎長度（如結(jié)扎50%-60%盲腸可誘導(dǎo)中度膿毒癥）和穿孔針規(guī)格（19G針頭增加死亡率）。

LPS模型：適合快速篩選抗炎藥物，需根據(jù)動物品系調(diào)整劑量（如C57BL/6小鼠常用5-10 mg/kg）

二、實(shí)驗(yàn)操作中的“致命細(xì)節(jié)”

1. CLP模型操作要點(diǎn)

麻醉與無菌：推薦使用異氟烷或戊巴比妥鈉麻醉，避免麻醉過深導(dǎo)致術(shù)中死亡。手術(shù)器械需高溫滅菌，術(shù)區(qū)剃毛后用碘伏消毒，降低感染風(fēng)險。

盲腸處理：

①結(jié)扎位置需避開回盲瓣，保持腸道連續(xù)性。

②穿孔后輕擠盲腸排出少量糞便（約1滴），確保穿孔通暢但避免過度污染腹腔。

③縫合與復(fù)蘇：采用4-0可吸收縫線分層縫合腹膜及皮膚，術(shù)后立即腹腔注射預(yù)熱生理鹽水（50 mL/kg）并放置于37℃溫墊復(fù)蘇。

2. LPS模型關(guān)鍵參數(shù)

①劑量控制：過高劑量（如>20 mg/kg）易致急性死亡，建議預(yù)實(shí)驗(yàn)確定最佳劑量。

②注射方式：腹腔注射需避開臟器，避免直接損傷；靜脈注射適用于快速誘導(dǎo)全身反應(yīng)。

三、術(shù)后管理：決定模型穩(wěn)定性的隱形因素

□鎮(zhèn)痛與補(bǔ)液

CLP術(shù)后24小時內(nèi)皮下注射丁丙諾啡（0.05 mg/kg）緩解疼痛，減少應(yīng)激反應(yīng)。

每日補(bǔ)充5%葡萄糖鹽水（1-2 mL/只），維持水電解質(zhì)平衡。

□環(huán)境控制

保持溫度（25±1℃）和濕度（50%-60%），使用無塵墊料減少感染風(fēng)險。

單獨(dú)飼養(yǎng)術(shù)后動物，避免同類攻擊導(dǎo)致傷口裂開。

□監(jiān)測指標(biāo)

①生存率：CLP模型需記錄48小時存活率（中度膿毒癥約50%-60%）。

②生理指標(biāo)：體溫（膿毒癥早期常升高，晚期降低）、呼吸頻率（>150次/分鐘提示呼吸窘迫）。

③行為學(xué)評分：采用小鼠膿毒癥評分（MSS），評估豎毛、活動度、眼分泌物等。

四、數(shù)據(jù)驗(yàn)證：從表型到機(jī)制的全面分析

▲生化與炎癥指標(biāo)

→血液檢測：白細(xì)胞計(jì)數(shù)（WBC）、中性粒細(xì)胞/淋巴細(xì)胞比值（NLR）、CRP、PCT2。

→細(xì)胞因子：ELISA檢測TNF-α、IL-6、IL-10水平，反映炎癥與免疫抑制狀態(tài)。

▲組織病理學(xué)

→肝、腎、肺組織HE染色，觀察炎性細(xì)胞浸潤、水腫及壞死。

→免疫組化檢測器官中NF-κB、HMGB1等炎癥通路標(biāo)志物表達(dá)。

▲模型驗(yàn)證標(biāo)準(zhǔn)

→CLP模型：術(shù)后12小時出現(xiàn)菌血癥，18-24小時死亡率顯著上升。

→LPS模型：注射后6小時血清TNF-α達(dá)峰值，24小時IL-6持續(xù)升高。

五、倫理與可重復(fù)性：不可忽視的科研底線

倫理規(guī)范

→遵循3R原則（替代、減少、優(yōu)化），術(shù)前通過動物倫理委員會審批。

→采用二氧化碳安樂死，避免不必要的痛苦8。

可重復(fù)性保障

→詳細(xì)記錄操作參數(shù)（如結(jié)扎盲腸長度、針頭型號、LPS批號）。

→設(shè)立假手術(shù)組（僅開腹不結(jié)扎）和陽性對照組（如地塞米松干預(yù)），確保數(shù)據(jù)可比性。

結(jié)語

構(gòu)建膿毒癥動物模型是一項(xiàng)高度精細(xì)的工作，從模型選擇到數(shù)據(jù)驗(yàn)證的每個環(huán)節(jié)均需嚴(yán)格把控。CLP模型雖操作復(fù)雜，但更貼近臨床；LPS模型則適用于機(jī)制初探。
通過優(yōu)化術(shù)后管理、規(guī)范數(shù)據(jù)采集，并結(jié)合多維度驗(yàn)證，可顯著提升實(shí)驗(yàn)的可靠性與論文發(fā)表價值

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