瓊脂糖凝膠電泳步驟【新手入門】
2024-09-27 15:50:46
來源/作者：普拉特澤-生物醫(yī)學整體課題外包平臺
沒日沒夜地忙了五天，終于可以穩(wěn)定地重復實驗了！為了幫助大家少走彎路，普拉特澤生物寫了一篇瓊脂糖凝膠電泳的步驟教程。雖然瓊脂糖凝膠電泳是一個相對簡單的實驗，沒有太多繁瑣的步驟，但每次跑電泳還是挺費時間的。尤其是在配膠這一步，很容易踩坑。希望這篇教程能幫到大家，讓你們少踩坑，多成功！
?一、實驗準備?
在開始實驗之前，首先需要用蒸餾水將制膠模具和梳子沖洗干凈，確保無雜質(zhì)殘留。隨后，將模具放置在制膠平板上，并架好梳子，為后續(xù)的凝膠制備做好準備。
①?凝膠緩沖液配制?：根據(jù)欲分離的DNA片段大小，用凝膠緩沖液（如TAE或TBE）配制適宜濃度的瓊脂糖凝膠。一般而言，常用濃度為0.5%至2%，但具體濃度需根據(jù)實驗需求確定。
二、凝膠制備
?㈠瓊脂糖溶解?：準確稱量瓊脂糖干粉，加入配制的三角燒瓶內(nèi)，再加入適量的電泳緩沖液。放入微波爐內(nèi)加熱至瓊脂糖完全溶解，期間需不時搖動燒瓶以防溢出。
㈡凝膠冷卻與染料添加?：待瓊脂糖溶液冷卻至適宜溫度（約60℃左右，不燙手），加入適量的核酸染料（如EB或GelRed），輕輕旋轉(zhuǎn)以充分混勻凝膠溶液。注意，EB存在毒性，操作時應佩戴防護手套。
㈢鋪膠?：將冷卻后的凝膠溶液緩緩倒入已準備好的模具中，注意避免產(chǎn)生氣泡。室溫下靜置約20-30分鐘，直至凝膠完全凝結。
三、電泳前準備
?①梳子拔出與凝膠放置?：凝膠凝固后，小心拔出梳子，避免破壞凝膠。將凝膠放置在電泳槽內(nèi)，確保樣品孔位于電場負極一側。
②電泳緩沖液加入?：向電泳槽中倒入適量的電泳緩沖液，液面應略高于凝膠表面，約1mm左右。檢查樣品孔內(nèi)是否有氣泡，并設法去除。
四、上樣與電泳
?①樣品準備?：在DNA樣品中加入適量的Loading Buffer，混勻后使用加樣器將混合液緩慢加入凝膠的樣品孔中。注意避免樣品溢出或污染其他孔。
?②電泳設置?：接通電源，設置電泳參數(shù)。一般情況下，電壓可設置為50V至120V不等，電泳時間根據(jù)實驗需求確定。DNA樣品在電場作用下由負極向正極移動。
五、電泳后處理
㈠?觀察結果?：電泳結束后，關閉電源。取出凝膠，在凝膠成像儀或紫外分析儀上觀察電泳結果。DNA存在處會顯示出亮色熒光條帶（如EB為橙紅色，GelRed為紅色或綠色），通過與標準的核酸Marker比較，可以估算出擴增產(chǎn)物的大小。
㈡數(shù)據(jù)記錄與分析?：記錄并分析電泳結果，根據(jù)需要進行后續(xù)實驗或數(shù)據(jù)處理。
六、注意事項
①凝膠濃度選擇應根據(jù)樣品DNA分子大小而定。
②操作過程中應避免產(chǎn)生氣泡，以免影響電泳結果。
③微波爐加熱瓊脂糖時需小心操作，以防突然產(chǎn)生氣泡導致溢出。
④EB等核酸染料具有毒性，操作時應佩戴防護手套。
⑤電泳緩沖液多次使用后應及時更換，以免影響電泳效果。
通過以上步驟，可以完成瓊脂糖凝膠電泳實驗，對DNA片段進行分離、鑒定和純化。
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