WB實驗原理及流程圖
2023-03-16 16:25:48
來源/作者：普拉特澤-生物醫(yī)學整體課題外包平臺
今天來給大家分享WB實驗的原理以及流程圖。普拉特澤生物為廣大科研人員提供長期穩(wěn)定生物實驗，本文給大家分享咱們技術(shù)長期總結(jié)下來的WB實驗原理以及流程
一、Western blot實驗原理
WB實驗是Western Blotting的縮寫，也稱為免疫印跡實驗，是一種用于檢測特定蛋白質(zhì)的方法。采用的是聚丙烯酰胺凝膠 (PAGE) 電泳，被檢測物是
蛋白質(zhì)，“探針”是抗體，“顯色”用標記的二抗。經(jīng)過PAGE分離的蛋白質(zhì)樣品，轉(zhuǎn)移到固相載體（如硝酸纖維素薄膜）上，固相載體以非共價鍵形式
吸附蛋白質(zhì)，且能保持電泳分離的多肽類型及其生物學活性不變。以固相載體上的蛋白質(zhì)或多肽作為抗原，與對應(yīng)的特異性抗體起免疫反應(yīng)，再與酶或
同位素標記的第二抗體起反應(yīng)，經(jīng)過底物顯色或放射自顯影以檢測電泳分離的特異性目的基因表達的蛋白成分。
該實驗通常分為以下幾個步驟：
蛋白質(zhì)提?。簭募毎蚪M織中提取蛋白質(zhì)，通常使用一種稱為RIPA緩沖液的提取緩沖液。
蛋白質(zhì)分離：將提取的蛋白質(zhì)通過電泳分離，常用的電泳方法包括SDS-PAGE和非變性PAGE。
轉(zhuǎn)移：將分離的蛋白質(zhì)通過電泳轉(zhuǎn)移到聚合物膜上，通常使用的聚合物膜是聚丙烯酰胺凝膠膜或硝酸纖維素膜。
阻斷：用一種稱為“阻斷液”的液體在聚合物膜上進行非特異性結(jié)合，防止非特異性的抗體結(jié)合到聚合物膜上。
一次抗體孵育：使用一種特異性抗體與目標蛋白質(zhì)結(jié)合。
二次抗體孵育：使用一種標記有酶或熒光物質(zhì)的二次抗體與一次抗體結(jié)合，以標記目標蛋白質(zhì)。
檢測：使用化學發(fā)光或熒光儀器檢測熒光或酶反應(yīng)，確定目標蛋白質(zhì)的位置和數(shù)量。
二、以下是WB實驗的流程圖：
蛋白質(zhì)提取 -> 蛋白質(zhì)分離 -> 轉(zhuǎn)移 -> 阻斷 -> 一次抗體孵育 -> 二次抗體孵育 -> 檢測
(附WB實驗流程圖）
今天關(guān)于WB實驗原理以及流程就分享到這兒啦~如果您在實驗過程中遇到技術(shù)問題，或者需要實驗外包和代做，可與我們技術(shù)老師聯(lián)系哦：18570028002（微信同號）
電話：400-691-6686
在線時間：8:00-24:00
微信關(guān)注公眾號
湘公網(wǎng)安備