
攻克蛋白表達難題?原核表達系統解鎖高產量、低成本的重組蛋白制備新方案!
2025-09-04 11:55:11
來源/作者:普拉特澤-生物醫(yī)學整體課題外包平臺
今天噗啦噗啦實驗室繼續(xù)跟大家一起學習新的實驗——蛋白原核技術表達,重組蛋白是至關重要的“工具”與“原料”。無論是抗體生產、藥物篩選、結構研究還是酶動力學分析,獲取大量高純度、有活性的目標蛋白都是成功的關鍵一步!關注我們視頻號還可以無痛審批查閱蛋白表達實驗哦:18570028002(微信)
今天,我們將把目光聚焦于一項成熟、強大且經濟高效的技術——蛋白原核表達技術
為什么原核表達系統經久不衰?
原核表達系統,尤其是最常用的大腸桿菌(E. coli)系統,自問世以來一直是重組蛋白表達的首選平臺之一。其經久不衰的魅力源于以下幾點:
操作簡便,周期極短:原核系統遺傳背景清晰,載體構建簡單,轉化后培養(yǎng)速度快(通常僅需十幾小時即可收獲菌體)。從基因克隆到蛋白純化,最快一周內即可完成,極大地加速了研發(fā)進程。
成本低廉,易于放大:大腸桿菌培養(yǎng)基成分簡單、價格便宜,發(fā)酵工藝成熟,能夠輕松實現從搖瓶到發(fā)酵罐的規(guī)?;糯?,非常適合大規(guī)模生產,可顯著降低研發(fā)和生產成本。
表達量高,穩(wěn)定性好:強大的原核啟動子(如T7, lac, tac等)能驅動目標基因高效轉錄和翻譯, often可獲得占菌體總蛋白相當高比例的重組蛋白,產量非常可觀。
原核表達并非萬能?關鍵挑戰(zhàn)與我們的破解之道
當然,任何技術都有其適用邊界。原核表達在面對一些復雜蛋白時,可能會遇到“包涵體”形成(蛋白不可溶)、缺乏真核特定位點修飾(如糖基化)等問題。
但別擔心,這些挑戰(zhàn)早已有了成熟的應對策略:
? 挑戰(zhàn)一:包涵體(Inclusion Bodies)形成
? 破解策略:通過優(yōu)化表達條件(如降低誘導溫度、調整IPTG濃度誘導時間)、與分子伴侶(Chaperones)共表達、選用特殊菌株(如Origami系列,提供二硫鍵形成所需環(huán)境)等方式,可有效增加可溶性蛋白的比例。
? 挑戰(zhàn)二:蛋白無活性或錯誤折疊
? 破解策略:對于形成包涵體的蛋白,我們同樣可以提供高效的體外復性(Refolding) 方案,幫助蛋白恢復正確構象與活性。
? 挑戰(zhàn)三:缺乏翻譯后修飾
? 破解策略:對于需要簡單修飾的蛋白,可選擇具有特殊修飾能力的原核系統。對于復雜修飾,則需理性判斷,原核系統更適用于無需糖基化的蛋白(如細胞因子、部分酶類、抗原片段等)。

如何判斷您的項目是否適合原核表達?
您的蛋白如果符合以下特征,那么選擇原核表達系統將事半功倍:
? 基因來源于原核生物。
? 分子量較?。ㄍǔ?lt;70 kDa)。
? 結構相對簡單,不需要復雜的真核翻譯后修飾(如糖基化、磷酸化等)。
? 用于結構研究、抗體制備、酶學分析或作為抗原。
四、 選擇專業(yè)的原核表達服務,讓您的科研之路更順暢
面對復雜的優(yōu)化工作,選擇一個經驗豐富的合作伙伴至關重要。我們的蛋白原核表達服務為您提供:
? 一站式解決方案:從密碼子優(yōu)化、載體構建、小量試表達到大規(guī)模發(fā)酵生產,我們提供全流程服務。
? 多種表達方案:提供包括包涵體表達與復性、可溶性表達在內的多種策略,最大限度提高成功率。
? 精湛的純化工藝:采用AKTA等高端純化系統,提供鎳柱(His-Tag)、 GST柱、離子交換等多種純化方式,確保蛋白的高純度與高活性。
? 詳盡的質量控制:提供SDS-PAGE、Western Blot、HPLC、內毒素檢測等全面質檢報告,確保產物符合您的實驗要求。
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