Dot Blot
Dot Blot(斑點(diǎn)雜交或縫隙印跡)是分子生物學(xué)中用于檢測生物分子，檢測、分析和鑒定蛋白質(zhì)/核酸的一種技術(shù)。它是對Northern blot、Southern blot或Western blot方法的簡化。
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實(shí)驗(yàn)介紹
【技術(shù)原理】
在斑點(diǎn)雜交中，要檢測到的生物分子不是首先通過電泳分離出來的，相反，將含有被檢測分子的混合物直接點(diǎn)在膜上，烘烤固定。然后用核苷酸探針(Northern blot、Southern blot)或抗體(Western blot)雜交后檢測。這種方法耗時(shí)短，可做半定量分析。一張膜上可同時(shí)檢測多個(gè)樣品。
【實(shí)驗(yàn)方法】
（1）DNA斑點(diǎn)雜交：
①.先將膜在水中浸濕，再放到15×SSC中。
②.將DNA樣品溶于水或TE,煮沸5min,冰中速冷。
③.用鉛筆在濾膜上標(biāo)好位置，將DNA點(diǎn)樣于膜上，每個(gè)樣品一般點(diǎn)5μl（2-10μg DNA）。
④.將膜烘干，密封保存?zhèn)溆谩?/span>
（2）RNA斑點(diǎn)雜交：
與上法類似，每個(gè)樣品至多加10μg總RNA（經(jīng)酚/氯仿或異硫氰酸胍提取純化），方法是將RNA溶于5μl DEPC水，加5μl甲醛/SSC緩沖液（10×SSC中含6.15mol/L甲醛），使RNA變性，然后取5-8μl點(diǎn)樣于處理好的濾膜上，烘干。
（3）蛋白斑點(diǎn)雜交：
①．先將PVDF膜在甲醇中浸濕，再放到PBS中，然后用濾紙吸干表面水漬。
②．將蛋白樣本變性處理，取2μl點(diǎn)樣于膜上，烘干。
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