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ELISA酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)操作常見問題答疑【附視頻教程】

2022-04-07 17:30:33

來源/作者:普拉特澤-生物醫(yī)學(xué)整體課題外包平臺

   ELISA酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)實(shí)驗(yàn)操作的常見問題答疑由普拉特澤生物旗下生物科研培訓(xùn)品牌《春風(fēng)學(xué)院》對數(shù)千例ELISA實(shí)驗(yàn)分析后總結(jié)分享,文章末更有ELISA實(shí)驗(yàn)理論+實(shí)操視頻課程參考學(xué)習(xí),快來學(xué)習(xí)吧。


   Qustion1顯色極淺或不顯色

   1)漏加底物成分、底物失效、底物配制濃度計(jì)算錯(cuò)誤;

   2)整個(gè)ELISA過程中存在抗原或抗體不匹配;

   3)整個(gè)ELISA過程中樣品稀釋過度;

   4)稀釋體系錯(cuò)誤,如使用含蛋白質(zhì)成分的試劑進(jìn)行包被。


   Qustion2:全板陽性

   1)酶標(biāo)抗原或抗體濃度過高,嘗試降低濃度;

   2)使用的封閉試劑不正確,或者未封閉;

   3)酶標(biāo)抗原或抗體與體系中其他試劑有結(jié)合;

   4)底物被酶標(biāo)抗原或抗體污染。

   Qustion3:不均勻顯色

   1)酶標(biāo)板質(zhì)量問題,重新檢測酶標(biāo)板均一性;

   2)包被或加樣過程中有部分孔漏加、少加等情況,可能是操作者不細(xì)心,也可能是移液器漏氣;

   3)加樣時(shí)移液器打入太多氣泡;

   4)選購的酶標(biāo)板不正確,可能誤選其他用途的板子;

   5)溫育過程中板子疊放過厚;

   6)加樣或稀釋過程中試劑沒有充分混勻,或稀釋梯度計(jì)算錯(cuò)誤;

   7)洗板失誤,部分孔未加洗滌液或洗滌液加入去垢劑后未充分混勻,或洗滌過程中帶入氣泡。

   Qustion4:顯色過快

   1)酶標(biāo)抗原或抗體濃度過高;

   2)某一試劑濃度過高。

   Qustion5:顯色過慢

   1)酶標(biāo)抗原或抗體濃度過底,或者標(biāo)記效率低,或者標(biāo)記后免疫活性受影響;

   2)試劑被污染,如HRP酶標(biāo)記的抗原或抗體被疊氮鈉污染;

   3)反應(yīng)溫度過低;

   4)底物緩沖液pH不正確。

   Qustion6:背景深

   1)酶標(biāo)抗原或抗體濃度過高;

   2)抗體的非特異性結(jié)合;

   3)抗原或抗體不純;

   4)二抗的種屬交叉識別。
   好啦,關(guān)于ELISA酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)操作時(shí)的常見問題就總結(jié)完了,歡迎大家留言補(bǔ)充,視頻學(xué)習(xí)課程請點(diǎn)擊:ELISA 理論+實(shí)操,科研枯燥但美麗,一起進(jìn)步吧!


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