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   普拉特澤生物為廣大生命科學(xué)研究人員提供可根據(jù)TUNEL檢測不同的實(shí)驗(yàn)報告步驟，本文就跟大家一起繼續(xù)探究采用TUNEL染色技術(shù)檢測組織樣本中的細(xì)胞凋亡水平。
一、   實(shí)驗(yàn)樣本及分組

樣本：大鼠腦

二、 實(shí)驗(yàn)結(jié)果

                                        圖1 tunel染色示意圖 100X

三、實(shí)驗(yàn)結(jié)論

凋亡/陽性細(xì)胞呈深棕色。
四、實(shí)驗(yàn)材料

1. 主要儀器

2.主要試劑

一、 實(shí)驗(yàn)原理

細(xì)胞在發(fā)生凋亡時，會激活一些DNA內(nèi)切酶，這些內(nèi)切酶會切斷核小體間的基因組DNA。細(xì)胞凋亡時抽提DNA進(jìn)行電泳檢測，可以發(fā)現(xiàn)180~200bp的DNA ladder。基因組DNA斷裂時，暴露的3'-OH可以在末端脫氧核苷酸轉(zhuǎn)移酶(Terminal Deoxynucleotidyl Transferase, TdT) 的催化下加上生物素標(biāo)記的dUTP，在DAB的存在下，產(chǎn)生很強(qiáng)的顏色反應(yīng)（呈深棕色），從而可以通過顯微鏡檢測細(xì)胞凋亡的情況。
二、方法步驟

1.脫蠟

1)   65℃烤片2 h；

2)   二甲苯（I）中脫蠟10 min；

3)   二甲苯（II）中脫蠟10 min；

4)   100%乙醇（I）中5 min洗去二甲苯；

5)   100%乙醇（II）中5 min洗去二甲苯。

2.水化

1)   95%乙醇中水化5 min；

2)   85%乙醇中水化5 min；

3)   75%乙醇中水化5 min；

4)   蒸餾水中水化待用。

3.通透

1)   蛋白酶K修復(fù)：每個樣本上滴加100 μL蛋白酶K工作液，37℃反應(yīng)30 min；

2)   PBS浸洗3次各5 min。

4. 標(biāo)記

1)   每樣滴加50μL的Tunel反應(yīng)混合物，37℃避光孵育60 min；

2)   PBS充分浸洗3次各5 min；

3)   每個樣本滴加50 μL converter-POD工作液，濕盒中37℃避光反應(yīng)30 min；

4)   PBS充分浸洗3次各5 min。

5. 顯色

1)   根據(jù)說明書配制DAB顯色液；

2)   每個樣本滴加50 μL DAB顯色工作液，室溫顯色30 s；

3)   蒸餾水稍洗終止顯色。

6.復(fù)染

1)   蘇木素染色30 s；

2)   流水沖洗2 min。

7.分化返藍(lán)

1)   1%鹽酸酒精分化2 s；

2)   流水沖洗切片5 min。

8.脫水

1)   蒸餾水過洗1~2 s；

2)   85%乙醇脫水5 min；

3)   95%乙醇脫水5 min；

4)   無水乙醇脫水5min；

5)   無水乙醇脫水5 min。

9.透明

1)   二甲苯（I）透明5 min；

2)   二甲苯（II）再次透明5 min。

10.封片

1)   在石蠟切片的中央滴加適量中性樹膠，蓋上蓋玻片封固；

2)   在通風(fēng)櫥內(nèi)室溫晾干。

11.鏡檢

1)  顯微鏡下觀察拍照。

今天關(guān)于TUNEL染色就分享到這兒啦~如果您在實(shí)驗(yàn)過程中遇到技術(shù)問題，或者需要實(shí)驗(yàn)外包和代做，可與我們技術(shù)老師聯(lián)系18570028002（微信同號）