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實驗介紹
【應用簡介】
成球能力是腫瘤干細胞體外鑒定的一個重要方法，其判斷的是單個細胞在合適的條件培養(yǎng)基自我更新的能力，一般用細胞球形成效率表示。對于某些腫瘤如膠質(zhì)瘤和乳腺癌，它們的腫瘤干細胞在體外條件培養(yǎng)時相對較容易形成細胞球，而另一些上皮腫瘤如肝癌、結腸癌等則相對成球困難些。
【技術原理】
腫瘤干細胞能分化出不同表型，具有不斷自我更新和分化能力，在添加了生長因子的無血清培養(yǎng)基中能培養(yǎng)形成細胞球。
【實驗方法】
Step1：細胞培養(yǎng)；
Step2：細胞轉(zhuǎn)染或藥物處理；
Step3：將細胞接種于超低粘附培養(yǎng)板中，以成球培養(yǎng)基培養(yǎng)；
Step4：圖片采集。
案例展示
處理組細胞成球較對照組小，說明該處理因素能抑制細胞成球。
技術總結
在細胞成球?qū)嶒炦^程中需配制成球?qū)Ｓ门囵B(yǎng)基，所用細胞培養(yǎng)板為超低黏附培養(yǎng)板。細胞接種密度需要自己摸索。低密度常用于原代腫瘤干細胞的提取，篩選可以非粘附生長的細胞。高密度用于細胞球的擴增，一般來說5000/ml以上。培養(yǎng)過程中無需換液，隔2-3天補液即可。
送檢與交付標準
| 樣品類型 | 樣品需求 | 保存條件 | 運輸條件 | 備注 |
|---|---|---|---|---|
| 凍存細胞 | 1.取對數(shù)生長期的細胞，消化離心收集細胞，加入凍存液吹打混勻，裝入凍存管，標明細胞名稱/細胞代數(shù)，凍存細胞數(shù)量在1-5*106個/ml。 2.項目啟動后細胞復蘇，復蘇后3天反饋細胞狀態(tài)，3-5天反饋細胞污染情況，5-7天反饋支原體污染情況。 3. 細胞詳細信息（名稱、培養(yǎng)基和其他培養(yǎng)條件等，如經(jīng)過特別處理需告知并提供必要的信息） | 液氮 | 干冰 | 所有樣本均須有唯一標記，且標記清晰可識 |
| 復蘇后細胞 | 1.使用T25培養(yǎng)瓶運輸。細胞匯合度達到60%以上，裝滿培養(yǎng)液，只留紐扣大小的氣泡，瓶口用封口膜封好，標明細胞名稱/細胞代數(shù)/接種時間/培養(yǎng)基類型，瓶子固定運輸。 2.收到細胞后3天反饋細胞狀態(tài)，3-5天反饋細胞污染情況，5-7天反饋支原體污染情況。 3. 細胞詳細信息（名稱、培養(yǎng)基和其他培養(yǎng)條件等，如經(jīng)過特別處理需告知并提供必要的信息） | 常溫 | 常溫 | |
| 質(zhì)粒 | 1.純度高，無內(nèi)毒素，無蛋白質(zhì)，基因組DNA/RNA污染，質(zhì)粒A260:A280的比值在1.8-2.0之間 2.濃度不低于0.5μg/μl，總量大于100μg，無內(nèi)毒素處理 3. 載體詳細信息，包括名稱、大小、抗性、熒光標記 | -20℃ | 冰袋 | |
| 病毒 | 1.慢病毒：滴度不低于1*108TU/ml，體積約200μl，標明制備時間，且沒有反復凍融 2.腺病毒：滴度不低于1*109PFU/ml，體積約200μl，標明制備時間，且沒有反復凍融 3.明確是否表達熒光標簽蛋白及其種類，最好需要提供病毒載體圖譜； | -80℃ | 干冰 |
電話：400-691-6686
在線時間：8:00-24:00
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