細(xì)胞增殖檢測(cè)
流式細(xì)胞術(shù)是檢測(cè)細(xì)胞增殖的一種重要手段，其優(yōu)點(diǎn)在于能夠?qū)崿F(xiàn)多熒光指標(biāo)同時(shí)檢測(cè)，并且可以對(duì)混合樣本中的特定細(xì)胞進(jìn)行增殖分析，常用CFSE和BrdU法。
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實(shí)驗(yàn)介紹
【技術(shù)原理】
1、CFSE（CFDA-SE） 是一種可對(duì)活細(xì)胞進(jìn)行熒光標(biāo)記的新型染料，可以標(biāo)記活體細(xì)胞。CFDA-SE是一種帶有琥珀酰亞胺(NHS)的熒光染料，可以結(jié)合細(xì)胞內(nèi)的蛋白質(zhì)。CFDASE在結(jié)構(gòu)上將酚羥基部位改造成AM體，所以自身不發(fā)熒光，熒光背景低，脂溶性高，能夠輕易穿透細(xì)胞膜，進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)的CFDA-SE的AM 部位能被細(xì)胞內(nèi)酯酶水解生成CFSE，通過(guò)共價(jià)結(jié)合賴氨酸側(cè)鏈的氨基而摻入細(xì)胞內(nèi)和細(xì)胞表面的蛋白，且結(jié)合后發(fā)出強(qiáng)的綠色熒光。細(xì)胞分裂增殖過(guò)程中，它的熒光強(qiáng)度會(huì)隨著細(xì)胞的分裂而逐級(jí)遞減，標(biāo)記熒光可平均分配至兩個(gè)子代細(xì)胞中，因此其熒光強(qiáng)度是親代細(xì)胞的一半。CFSE的琥珀酰亞胺(NHS)和細(xì)胞內(nèi)蛋白質(zhì)的氨基部位結(jié)合，固定在細(xì)胞內(nèi)，不會(huì)漏出細(xì)胞外。CFSE進(jìn)入細(xì)胞后定位于細(xì)胞膜、細(xì)胞質(zhì)和細(xì)胞核，在細(xì)胞核的熒光最強(qiáng)。
2、BrdU是一種胸腺嘧啶核苷類(lèi)似物。它也能夠在細(xì)胞增殖時(shí)期代替胸腺嘧啶（T）滲入正在復(fù)制的DNA分子，通過(guò)基于EdU與Apollo熒光染料的特異性反應(yīng)檢測(cè)DNA復(fù)制活性，通過(guò)檢測(cè)EdU標(biāo)記便能準(zhǔn)確地反映細(xì)胞的增殖情況。
【實(shí)驗(yàn)流程】
CFSE：加入CFSE-孵育-洗滌-培養(yǎng)-上機(jī)
BrdU：加入BrdU-孵育-洗滌-培養(yǎng)-上機(jī)
案例展示
送檢與交付標(biāo)準(zhǔn)
| 樣品類(lèi)型 | 樣品需求 | 運(yùn)輸條件 |
|---|---|---|
| 組織 | 離體后組織制成單細(xì)胞懸液，加入PBS培養(yǎng)基內(nèi) | 常溫運(yùn)輸 |
| 活細(xì)胞 | 樣本量：1*106個(gè)細(xì)胞/TEST，加入PBS培養(yǎng)基內(nèi) | 常溫運(yùn)輸 |
| 血液 | 將血液采集在EDTA肝素鈉的抗凝采血管內(nèi) | 常溫運(yùn)輸 |
電話：400-691-6686
在線時(shí)間：8:00-24:00
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