血管生成
血管生長(zhǎng)是腫瘤發(fā)生的關(guān)鍵步驟。無(wú)論原發(fā)性腫瘤還是繼發(fā)性腫瘤，一旦生長(zhǎng)直徑超過(guò)1~2 mm，都會(huì)有血管生成，這是由于腫瘤細(xì)胞自身可分泌多種生長(zhǎng)因子，誘導(dǎo)血管生成。
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實(shí)驗(yàn)介紹
【應(yīng)用簡(jiǎn)介】
血管生長(zhǎng)是腫瘤發(fā)生的關(guān)鍵步驟。無(wú)論原發(fā)性腫瘤還是繼發(fā)性腫瘤，一旦生長(zhǎng)直徑超過(guò)1~2 mm，都會(huì)有血管生成，這是由于腫瘤細(xì)胞自身可分泌多種生長(zhǎng)因子，誘導(dǎo)血管生成。多數(shù)惡性腫瘤的血管生成密集且生長(zhǎng)迅速，因此，血管生成在腫瘤的發(fā)展轉(zhuǎn)移過(guò)程中起到重要作用，抑制這一過(guò)程將能明顯阻止腫瘤組織的發(fā)展和擴(kuò)散轉(zhuǎn)移。體外的血管生成實(shí)驗(yàn)?zāi)芎芎玫哪M腫瘤的血管發(fā)生過(guò)程，并且適合研究藥物對(duì)這一過(guò)程的影響。
【技術(shù)原理】
應(yīng)用Matrigel模擬機(jī)體環(huán)境，上面接種腫瘤細(xì)胞，觀察血管生成情況。
【實(shí)驗(yàn)方法】
Step1：細(xì)胞培養(yǎng)
Step2：細(xì)胞轉(zhuǎn)染或藥物處理
Step3：鋪Matrigel膠
Step4：接種細(xì)胞
Step5：觀察血管生成情況
案例展示
與對(duì)照組相比，處理因素能夠明顯抑制血管生成。
技術(shù)總結(jié)
1、實(shí)驗(yàn)前一天需要將Matrigel置于冰盒，放入冰箱中，同時(shí)需要準(zhǔn)備一些預(yù)冷的槍頭用于吸取Matrigel膠；
2、將Matrigel膠加到血管生成載玻片時(shí)注意槍頭要垂直于內(nèi)孔的正上方加入Matrigel，防止有Matrigel流經(jīng)上孔而留下殘留膠；
3、需要按照細(xì)胞的生長(zhǎng)速度定時(shí)采集圖像，并且對(duì)其成管長(zhǎng)度、覆蓋面積、成環(huán)數(shù)和結(jié)點(diǎn)進(jìn)行測(cè)量和記錄，并且對(duì)其進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析；
4、分上下孔的ibidi血管生成載玻片能去除凹液面，使成像效果更好。
送檢與交付標(biāo)準(zhǔn)
| 樣品類型 | 樣品需求 | 保存條件 | 運(yùn)輸條件 | 備注 |
|---|---|---|---|---|
| 凍存細(xì)胞 | 1.取對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的細(xì)胞，消化離心收集細(xì)胞，加入凍存液吹打混勻，裝入凍存管，標(biāo)明細(xì)胞名稱/細(xì)胞代數(shù)，凍存細(xì)胞數(shù)量在1-5*106個(gè)/ml。 2.項(xiàng)目啟動(dòng)后細(xì)胞復(fù)蘇，復(fù)蘇后3天反饋細(xì)胞狀態(tài)，3-5天反饋細(xì)胞污染情況，5-7天反饋支原體污染情況。 3. 細(xì)胞詳細(xì)信息（名稱、培養(yǎng)基和其他培養(yǎng)條件等，如經(jīng)過(guò)特別處理需告知并提供必要的信息） | 液氮 | 干冰 | 所有樣本均須有唯一標(biāo)記，且標(biāo)記清晰可識(shí) |
| 復(fù)蘇后細(xì)胞 | 1.使用T25培養(yǎng)瓶運(yùn)輸。細(xì)胞匯合度達(dá)到60%以上，裝滿培養(yǎng)液，只留紐扣大小的氣泡，瓶口用封口膜封好，標(biāo)明細(xì)胞名稱/細(xì)胞代數(shù)/接種時(shí)間/培養(yǎng)基類型，瓶子固定運(yùn)輸。 2.收到細(xì)胞后3天反饋細(xì)胞狀態(tài)，3-5天反饋細(xì)胞污染情況，5-7天反饋支原體污染情況。 3. 細(xì)胞詳細(xì)信息（名稱、培養(yǎng)基和其他培養(yǎng)條件等，如經(jīng)過(guò)特別處理需告知并提供必要的信息） | 常溫 | 常溫 | |
| 質(zhì)粒 | 1.純度高，無(wú)內(nèi)毒素，無(wú)蛋白質(zhì)，基因組DNA/RNA污染，質(zhì)粒A260:A280的比值在1.8-2.0之間 2.濃度不低于0.5μg/μl，總量大于100μg，無(wú)內(nèi)毒素處理 3. 載體詳細(xì)信息，包括名稱、大小、抗性、熒光標(biāo)記 | -20℃ | 冰袋 | |
| 病毒 | 1.慢病毒：滴度不低于1*108TU/ml，體積約200μl，標(biāo)明制備時(shí)間，且沒(méi)有反復(fù)凍融 2.腺病毒：滴度不低于1*109PFU/ml，體積約200μl，標(biāo)明制備時(shí)間，且沒(méi)有反復(fù)凍融 3.明確是否表達(dá)熒光標(biāo)簽蛋白及其種類，最好需要提供病毒載體圖譜； | -80℃ | 干冰 |
電話：400-691-6686
在線時(shí)間：8:00-24:00
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