CHIP檢測
核酸和蛋白質(zhì)是組成生命的主要生物大分子，兩者的相互作用是構(gòu)成生命活動的生長、繁殖、運動、遺傳和代謝等生命活動的基礎(chǔ)。研究蛋白質(zhì)和核酸間的相互作用是人們探索生命現(xiàn)象奧秘的關(guān)鍵，CHIP檢測實驗是應(yīng)用于蛋白與核酸互作關(guān)系的重要參考。
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實驗介紹
【應(yīng)用簡介】
核酸和蛋白質(zhì)是組成生命的主要生物大分子，兩者的相互作用是構(gòu)成生命活動的生長、繁殖、運動、遺傳和代謝等生命活動的基礎(chǔ)。研究蛋白質(zhì)和核酸間的相互作用是人們探索生命現(xiàn)象奧秘的關(guān)鍵，ChIP檢測實驗是應(yīng)用于蛋白與核酸互作關(guān)系的重要參考。
【實驗原理】
CHIP實驗在活細(xì)胞狀態(tài)下固定蛋白質(zhì)－DNA復(fù)合物，并將其隨機切斷為一定長度范圍內(nèi)的染色質(zhì)小片段，然后通過免疫學(xué)方法沉淀此復(fù)合體，特異性地富集目的蛋白結(jié)合的DNA片段，通過對目的片斷的純化與檢測，從而獲得蛋白質(zhì)與DNA相互作用的信息。
【實驗方法】
Step1：細(xì)胞培養(yǎng)物交聯(lián)和樣品制備
Step2： 胞核制備和染色質(zhì)消化
Step3：染色質(zhì)消化和濃度分析
Step4：染色質(zhì)免疫沉淀法
Step5：將染色質(zhì)從抗體/Protein G Magnetic Beads上洗脫下來并解交聯(lián)
Step6：使用離心柱純化 DNA
Step7：用 PCR定量 DNA
案例展示
【結(jié)果分析】
1、陽性對照組條帶清晰無雜帶，陰性對照組正常，表明CHIP實驗結(jié)果可信，操作合格；
2、Input組條帶清晰可見，表明PCR擴增引物可用于該指標(biāo)的檢測；
3、樣本組1和樣本組2中檢測XX蛋白組均有條帶，表明該研究的基因的啟動子區(qū)和XX蛋白可發(fā)生結(jié)合。
【結(jié)果分析】
1、陽性對照組條帶清晰無雜帶，陰性對照組正常，表明CHIP實驗結(jié)果可信，操作合格；
2、Input組條帶清晰可見，表明PCR擴增引物可用于該指標(biāo)的檢測；
3、樣本組中檢測XX蛋白組無條帶，表明該研究的基因的啟動子區(qū)不可以和XX蛋白發(fā)生結(jié)合。
技術(shù)總結(jié)
【常見問題】
1、消化的染色質(zhì)濃度過低。
2、染色質(zhì)消化不足且片段過大（大于900 bp）。
3、樣品輸入對照組PCR反應(yīng)中無產(chǎn)物或產(chǎn)物很少。
4、陽性對照組蛋白H3-IP RPL30 PCR反應(yīng)中無產(chǎn)物。
5、陰性對照 Rabbit IgG-IP 和陽性對照 Histone H3-IP PCR 反應(yīng)中產(chǎn)物的數(shù)量相等。
【注意事項】
1、ChIP實驗要求必須是新鮮的組織或活細(xì)胞，一次實驗需至少需要150 mg新鮮的組織或2x10?個細(xì)胞，如不能提供新鮮的組織或活細(xì)胞，請聯(lián)系客服，獲得預(yù)處理方法；
2、部分抗體級別可能達(dá)不到ChIP級別的要求，需要采購對應(yīng)級別的抗體并通過陰陽性實驗反饋結(jié)果可信性；
3、ChIP對照：現(xiàn)有陽性對照H3和陰性對照IgG；
4、采用CST品牌的SimpleChIP? Plus Enzymatic Chromatin IP Kit (Magnetic Beads)試劑盒用于本實驗。
送檢與交付標(biāo)準(zhǔn)
| 樣品類型 | 樣品需求 | 保存條件 | 運輸條件 | 備注 |
|---|---|---|---|---|
| 動物組織 | 單個樣品>0.1g，2mlEP管或凍存管裝，不要過量；樣本應(yīng)盡量新鮮，如不能立即提取蛋白或核酸，應(yīng)液氮速凍后凍存于-80℃或更低，凍存樣本避免反復(fù)凍融以致降解 | -80℃ | 干冰 | 所有樣本均須有唯一標(biāo)記，且標(biāo)記清晰可識 |
| 種子樣本 | 去殼新鮮或保存于液氮中的的種子樣本，單個樣品>0.2g。 | -80℃ | 干冰 | |
| 貼壁/懸浮細(xì)胞 | 1. 總RNA或蛋白：106cell/指標(biāo)、漿/核RNA或蛋白：107cell/指標(biāo)、線粒體RNA或蛋白：2*107 cell/指標(biāo)，樣本盡量新鮮，細(xì)胞收取后直接加Trizol（QPCR檢測）或直接凍存于-80℃ 2. 若細(xì)胞處理（加藥、轉(zhuǎn)染、感染）后狀態(tài)差應(yīng)酌情加大收樣量 | -80℃ | 干冰 | |
| 全血/血清樣品 | 用抗凝管保存的外周血 5~10ml，骨髓 1~3ml； -80℃保存不超半周的白細(xì)胞勻漿>400μl，每 400μl 加入 400μl Trizol。 | -80℃ | 干冰 | |
| 石蠟包埋樣品 | 由標(biāo)準(zhǔn)的石蠟包埋盒包埋的石蠟塊，有效厚度大于 0.1cm； 新鮮的 FFPE 組織切片，每片厚度不超過 10μm，2~8 張，表面積不超過 250mm2。 | -20℃ | 冰袋 | |
| 抗體 | 1. 按樣本種屬提供滿足相應(yīng)實驗要求的抗體； 2. 按抗體說明書要求寄送，盡量避免分裝；如分裝，確保量足夠進行實驗，并提供抗體說明書。 3.保存抗體的抗體管上應(yīng)有能夠識別此抗體的標(biāo)記，抗體的量應(yīng)大于實驗所需的量。 | -20℃ | 冰袋 | |
| 引物 | 干粉，≥1OD，如進行預(yù)實驗，每個基因至少提供兩對引物， 附帶公司引物合成單。 | -20℃ | 冰袋或常溫 |
電話：400-691-6686
在線時間：8:00-24:00
微信關(guān)注公眾號
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