細(xì)胞侵襲
腫瘤細(xì)胞通過膜表面特定受體與基質(zhì)或基底膜的層粘連蛋白、纖維連接蛋白和IV型膠原等相粘連，然后腫瘤細(xì)胞可釋放蛋白水解酶或激活基質(zhì)中已存在的酶原，使基質(zhì)成分降解，最后腫瘤細(xì)胞運(yùn)動(dòng)而充填到被水解了的基質(zhì)的空隙處，如此三個(gè)過程不斷重復(fù)腫瘤細(xì)胞不斷向深層侵襲。
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實(shí)驗(yàn)介紹
【應(yīng)用簡(jiǎn)介】
腫瘤細(xì)胞通過膜表面特定受體與基質(zhì)或基底膜的層粘連蛋白、纖維連接蛋白和IV型膠原等相粘連，然后腫瘤細(xì)胞可釋放蛋白水解酶或激活基質(zhì)中已存在的酶原，使基質(zhì)成分降解，最后腫瘤細(xì)胞運(yùn)動(dòng)而充填到被水解了的基質(zhì)的空隙處，如此三個(gè)過程不斷重復(fù)腫瘤細(xì)胞不斷向深層侵襲。
【技術(shù)原理】
本實(shí)驗(yàn)采用的Matrigel是從小鼠EHS肉瘤中提取的基質(zhì)成分，含有LN、IV型膠原等。將Matrigel鋪在Transwell侵襲小室的多孔濾膜上，能形成與天然基底膜極為相似的基底膜結(jié)構(gòu)。具有侵襲能力的細(xì)胞在趨化劑誘導(dǎo)下可穿過多孔濾膜，侵襲細(xì)胞經(jīng)染色后，在顯微鏡下觀察和計(jì)數(shù)。
【實(shí)驗(yàn)方法】
Step1：制備條件培養(yǎng)基
Step2：包被基底膜
Step3：水化基底膜
Step4：接種細(xì)胞
Step5：培養(yǎng)細(xì)胞
Step6：固定及染色
Step7：鏡檢
案例展示
技術(shù)總結(jié)
1、24孔板下室一般加入600ul的培養(yǎng)基，特別注意的是，下層培養(yǎng)液和小室間常會(huì)有氣泡產(chǎn)生，一旦產(chǎn)生氣泡，下層培養(yǎng)液的趨化作用就減弱甚至消失了，在種板的時(shí)候要特別留心，一旦出現(xiàn)氣泡， 要將小空提起，去除氣泡，再將小室放進(jìn)培養(yǎng)板；
2、接種的細(xì)胞應(yīng)選擇處于對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期且狀態(tài)良好，細(xì)胞計(jì)數(shù)需準(zhǔn)確；
3、待細(xì)胞遷出，且形態(tài)展開后即可固定染色；
4、染色后，可用棉簽輕輕擦掉上層未遷出細(xì)胞；
5、拍照時(shí)，同一視野不可重復(fù)拍照，膜上小孔清晰，細(xì)胞形態(tài)明顯，所有照片的背景需統(tǒng)一。
送檢與交付標(biāo)準(zhǔn)
| 樣品類型 | 樣品需求 | 保存條件 | 運(yùn)輸條件 | 備注 |
|---|---|---|---|---|
| 凍存細(xì)胞 | 1.取對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的細(xì)胞，消化離心收集細(xì)胞，加入凍存液吹打混勻，裝入凍存管，標(biāo)明細(xì)胞名稱/細(xì)胞代數(shù)，凍存細(xì)胞數(shù)量在1-5*106個(gè)/ml。 2.項(xiàng)目啟動(dòng)后細(xì)胞復(fù)蘇，復(fù)蘇后3天反饋細(xì)胞狀態(tài)，3-5天反饋細(xì)胞污染情況，5-7天反饋支原體污染情況。 3. 細(xì)胞詳細(xì)信息（名稱、培養(yǎng)基和其他培養(yǎng)條件等，如經(jīng)過特別處理需告知并提供必要的信息） | 液氮 | 干冰 | 所有樣本均須有唯一標(biāo)記，且標(biāo)記清晰可識(shí) |
| 復(fù)蘇后細(xì)胞 | 1.使用T25培養(yǎng)瓶運(yùn)輸。細(xì)胞匯合度達(dá)到60%以上，裝滿培養(yǎng)液，只留紐扣大小的氣泡，瓶口用封口膜封好，標(biāo)明細(xì)胞名稱/細(xì)胞代數(shù)/接種時(shí)間/培養(yǎng)基類型，瓶子固定運(yùn)輸。 2.收到細(xì)胞后3天反饋細(xì)胞狀態(tài)，3-5天反饋細(xì)胞污染情況，5-7天反饋支原體污染情況。 3. 細(xì)胞詳細(xì)信息（名稱、培養(yǎng)基和其他培養(yǎng)條件等，如經(jīng)過特別處理需告知并提供必要的信息） | 常溫 | 常溫 | |
| 質(zhì)粒 | 1.純度高，無(wú)內(nèi)毒素，無(wú)蛋白質(zhì)，基因組DNA/RNA污染，質(zhì)粒A260:A280的比值在1.8-2.0之間 2.濃度不低于0.5μg/μl，總量大于100μg，無(wú)內(nèi)毒素處理 3. 載體詳細(xì)信息，包括名稱、大小、抗性、熒光標(biāo)記 | -20℃ | 冰袋 | |
| 病毒 | 1.慢病毒：滴度不低于1*108TU/ml，體積約200μl，標(biāo)明制備時(shí)間，且沒有反復(fù)凍融 2.腺病毒：滴度不低于1*109PFU/ml，體積約200μl，標(biāo)明制備時(shí)間，且沒有反復(fù)凍融 3.明確是否表達(dá)熒光標(biāo)簽蛋白及其種類，最好需要提供病毒載體圖譜； | -80℃ | 干冰 |
電話：400-691-6686
在線時(shí)間：8:00-24:00
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