TTC染色
TTC染色是TTC和活細(xì)胞線粒體內(nèi)的琥珀酸脫氫酶反應(yīng)，生成紅色的甲臜，用來表示細(xì)胞的活力。它是評(píng)價(jià)腦缺血損傷常用的指標(biāo)。
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實(shí)驗(yàn)介紹
【實(shí)驗(yàn)原理】
TTC（2，3，5—氯化三苯基四氮唑）是脂溶性光敏感復(fù)合物，它是呼吸鏈中吡啶—核苷結(jié)構(gòu)酶系統(tǒng)的質(zhì)子受體，與正常組織中的脫氫酶反應(yīng)而呈紅色，而缺血組織內(nèi)脫氫酶活性下降，不能反應(yīng)，故不會(huì)產(chǎn)生變化呈蒼白。故可以用來染色檢測(cè)哺乳動(dòng)物組織的缺血梗塞。
【實(shí)驗(yàn)方法】
Step1：取腦：可麻醉后直接取腦或經(jīng)生理鹽水灌注后取腦。因?yàn)槟X組織未用多聚甲醛固定，所以較軟，取腦時(shí)更應(yīng)仔細(xì)，保持大腦的完整性；
Step2：-20℃冰箱中速凍20分鐘左右，便于切片；
Step3：切片：一般切成5－6片，每隔2mm切一片。第一刀在腦前極與視交叉連線中點(diǎn)處；第二刀在視交叉部位；第三刀在漏斗柄部位；第四刀在漏斗柄與后葉尾極之間。如果需計(jì)算面積的話，應(yīng)切得均勻或用專門的腦槽；
Step4：將切片置于2%TTC中；
Step5：用錫箔紙蓋住后，放入37℃溫箱15～30min，不時(shí)翻動(dòng)腦片，使均勻接觸到染色液；
Step6：取出切片后擺放整齊拍照。
案例展示
技術(shù)總結(jié)
【常見問題】
1、染色過淺：染色時(shí)間不夠，適當(dāng)延長(zhǎng)染色時(shí)間；
2、切片破碎：取材不當(dāng)，取腦時(shí)更應(yīng)仔細(xì)，保持大腦的完整性?；蛩賰鰰r(shí)間不夠，切片時(shí)組織過軟，適當(dāng)延長(zhǎng)冷凍時(shí)間
【注意事項(xiàng)】
1、因?yàn)槟X組織未用多聚甲醛固定，所以較軟，取腦時(shí)更應(yīng)仔細(xì)，保持大腦的完整性；
2、切片時(shí)第一刀在腦前極與視交叉連線中點(diǎn)處；第二刀在視交叉部位；第三刀在漏斗柄部位；第四刀在漏斗柄與后葉尾極之間。如果需計(jì)算面積的話，應(yīng)切得均勻或用專門的腦槽。
送檢與交付標(biāo)準(zhǔn)
| 樣品類型 | 樣品需求 | 保存條件 | 運(yùn)輸條件 | 備注 |
|---|---|---|---|---|
| 新鮮組織 | 新鮮取材組織，用 PBS清洗干凈血液等，立即-80℃保存； | -80℃ | 干冰 | 所有樣本均須有唯一標(biāo)記，且標(biāo)記清晰可識(shí)。 |
| 一般固定組織 | 一般組織體積不超過2cmX2cmX0.5cm，固定時(shí)盡量保持組織的原有形態(tài)并清理干凈血液及多余部分，如腸道內(nèi)容物；固定液體積為組織大小的10倍以上，容器足夠容納組織不使其擠壓變形。標(biāo)注好固定液類型和固定時(shí)長(zhǎng)； | 常溫 | 常溫 | |
| 特殊固定組織 | 睪丸、眼球、脊髓、肌肉等組織：推薦使用對(duì)應(yīng)的特殊固定液進(jìn)行固定，以保證固定效果。如Bouin液，適用于睪丸組織、皮膚組織及眼球的固定； | |||
| 組織蠟塊 | 組織由標(biāo)準(zhǔn)的石蠟包埋盒包埋（尺寸為30*24*7mm），石蠟與組織要均勻接合，不能有裂痕；蠟塊厚度根據(jù)所需切片的數(shù)量而定，有效厚度至少要超過0.1cm。盡量提供半年內(nèi)的組織蠟塊，超過半年的蠟塊抗原可能丟失，做免疫組化可能出現(xiàn)檢測(cè)不到蛋白； | 常溫 | 常溫 | |
| 組織切片 | 需用防脫載玻片進(jìn)行撈片，并注明切片厚度、已烤片溫度與時(shí)間，組織應(yīng)在靠近切片下端 1/3 處； | 4℃ | 冰袋 | |
| 細(xì)胞爬片 | 使用 12 孔板或 24孔板專用細(xì)胞爬片，細(xì)胞爬片經(jīng)固定后用 PBS 洗滌 2~3 次，保存在 PBS 中，用封口膜密封孔板。每個(gè)爬片在孔板蓋上應(yīng)有唯一的標(biāo)記，并有電子版的分組信息，以防標(biāo)記在運(yùn)輸途中模糊； | 常溫 | 常溫 | |
| 植物樣本 | 新鮮組織FAA固定，木質(zhì)化程度不高；對(duì)于較薄的葉片，如果要求平行葉片切片，難以保證切完整；根莖要求直徑>1mm； | 常溫 | 常溫 | |
| 抗體 | 保存抗體的抗體管上應(yīng)有能夠識(shí)別此抗體的標(biāo)記，并附帶說明書，抗體的量應(yīng)大于實(shí)驗(yàn)所需的量。組織切片、組織芯片按稀釋后 100μl 一張切片計(jì)算抗體用量， 24 孔板細(xì)胞爬片圓形蓋玻片按稀釋后 200μl一張計(jì)算抗體用量，12 孔板細(xì)胞爬片圓形蓋玻片按稀釋后 400μl 一張計(jì)算抗體用量。 | -20℃ | 冰袋或干冰 |
電話：400-691-6686
在線時(shí)間：8:00-24:00
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