考馬斯亮藍(lán)染色
考馬斯亮藍(lán)有G250和R250兩種。其中考馬斯亮藍(lán)G250由于與蛋白質(zhì)的結(jié)合反應(yīng)十分迅速，常用來(lái)作為蛋白質(zhì)含量的測(cè)定?？捡R斯亮藍(lán)R250與蛋白質(zhì)反應(yīng)雖然比較緩慢，但是可以被洗脫下去，所以可以用來(lái)對(duì)病理組織內(nèi)的蛋白質(zhì)進(jìn)行染色。
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實(shí)驗(yàn)介紹
【實(shí)驗(yàn)原理】
考馬斯亮藍(lán)在游離狀態(tài)下呈紅色，最大光吸收在488nm；當(dāng)它與蛋白質(zhì)結(jié)合后變?yōu)榍嗌?，蛋白質(zhì)-色素結(jié)合物在595nm波長(zhǎng)下有最大光吸收。其光吸收值與蛋白質(zhì)含量成正比，因此可用于蛋白質(zhì)的定量測(cè)定。
【實(shí)驗(yàn)方法】
Step1：石蠟切片常規(guī)操作脫蠟水化；
Step2：切片復(fù)水后經(jīng)過(guò)7%(v/v)醋酸1~2min；
Step3：放入考馬斯藍(lán)R染色液中染色15min；
Step4：自水清洗5min后經(jīng)過(guò)蒸餾水；
Step5：脫水：依次經(jīng)85%、95%Ⅰ、95%Ⅱ各10秒，無(wú)水乙醇Ⅰ30s、無(wú)水乙醇Ⅱ1min；
Step6：透明：經(jīng)二甲苯Ⅰ1min、二甲苯Ⅱ2min；
Step7：中性樹膠固封，鏡檢。
案例展示
技術(shù)總結(jié)
【常見(jiàn)問(wèn)題】
1、染色時(shí)間過(guò)長(zhǎng)或過(guò)短導(dǎo)致的染色過(guò)深或過(guò)淺；
2、分化液分化時(shí)間過(guò)長(zhǎng)，導(dǎo)致組織染色陽(yáng)性過(guò)淺；
3、特殊組織如植物組織較脆，易出現(xiàn)掉片。
【注意事項(xiàng)】
1、控制染色時(shí)間，保證染色不至于過(guò)深或過(guò)淺，必要時(shí)可在顯微鏡下觀察控制染色時(shí)間；
2、分化時(shí)間不易過(guò)長(zhǎng)，保證陽(yáng)性顯色清晰可見(jiàn)；
3、特殊組織切片時(shí)應(yīng)控制切片厚度以及攤片時(shí)間，減少掉片風(fēng)險(xiǎn)。
送檢與交付標(biāo)準(zhǔn)
| 樣品類型 | 樣品需求 | 保存條件 | 運(yùn)輸條件 | 備注 |
|---|---|---|---|---|
| 新鮮組織 | 新鮮取材組織，用 PBS清洗干凈血液等，立即-80℃保存； | -80℃ | 干冰 | 所有樣本均須有唯一標(biāo)記，且標(biāo)記清晰可識(shí)。 |
| 一般固定組織 | 一般組織體積不超過(guò)2cmX2cmX0.5cm，固定時(shí)盡量保持組織的原有形態(tài)并清理干凈血液及多余部分，如腸道內(nèi)容物；固定液體積為組織大小的10倍以上，容器足夠容納組織不使其擠壓變形。標(biāo)注好固定液類型和固定時(shí)長(zhǎng)； | 常溫 | 常溫 | |
| 特殊固定組織 | 睪丸、眼球、脊髓、肌肉等組織：推薦使用對(duì)應(yīng)的特殊固定液進(jìn)行固定，以保證固定效果。如Bouin液，適用于睪丸組織、皮膚組織及眼球的固定； | |||
| 組織蠟塊 | 組織由標(biāo)準(zhǔn)的石蠟包埋盒包埋（尺寸為30*24*7mm），石蠟與組織要均勻接合，不能有裂痕；蠟塊厚度根據(jù)所需切片的數(shù)量而定，有效厚度至少要超過(guò)0.1cm。盡量提供半年內(nèi)的組織蠟塊，超過(guò)半年的蠟塊抗原可能丟失，做免疫組化可能出現(xiàn)檢測(cè)不到蛋白； | 常溫 | 常溫 | |
| 組織切片 | 需用防脫載玻片進(jìn)行撈片，并注明切片厚度、已烤片溫度與時(shí)間，組織應(yīng)在靠近切片下端 1/3 處； | 4℃ | 冰袋 | |
| 細(xì)胞爬片 | 使用 12 孔板或 24孔板專用細(xì)胞爬片，細(xì)胞爬片經(jīng)固定后用 PBS 洗滌 2~3 次，保存在 PBS 中，用封口膜密封孔板。每個(gè)爬片在孔板蓋上應(yīng)有唯一的標(biāo)記，并有電子版的分組信息，以防標(biāo)記在運(yùn)輸途中模糊； | 常溫 | 常溫 | |
| 植物樣本 | 新鮮組織FAA固定，木質(zhì)化程度不高；對(duì)于較薄的葉片，如果要求平行葉片切片，難以保證切完整；根莖要求直徑>1mm； | 常溫 | 常溫 | |
| 抗體 | 保存抗體的抗體管上應(yīng)有能夠識(shí)別此抗體的標(biāo)記，并附帶說(shuō)明書，抗體的量應(yīng)大于實(shí)驗(yàn)所需的量。組織切片、組織芯片按稀釋后 100μl 一張切片計(jì)算抗體用量， 24 孔板細(xì)胞爬片圓形蓋玻片按稀釋后 200μl一張計(jì)算抗體用量，12 孔板細(xì)胞爬片圓形蓋玻片按稀釋后 400μl 一張計(jì)算抗體用量。 | -20℃ | 冰袋或干冰 |
電話：400-691-6686
在線時(shí)間：8:00-24:00
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