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TSA多色免疫熒光

酪酰胺信號放大 (TSA) 技術(shù)是一類利用辣根過氧化酶 (HRP) 對靶蛋白進(jìn)行標(biāo)記的酶學(xué)檢測方法,類似常規(guī)免疫組化的DAB顯色方法,TSA技術(shù)同樣采多聚HRP的二抗,同樣有對應(yīng)的“顯色”步驟,HRP催化加入反應(yīng)體系的酪胺熒光素底物,產(chǎn)生活化熒光底物,活化底物可與抗原上的酪氨酸等殘基共價結(jié)合,使樣品上穩(wěn)定的共價結(jié)合酪胺熒光素是TSA多色免疫熒光實驗外包

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實驗原理

        酪酰胺信號放大 (TSA) 技術(shù)是一類利用辣根過氧化酶 (HRP) 對靶蛋白進(jìn)行標(biāo)記的酶學(xué)檢測方法,類似常規(guī)免疫組化的DAB顯色方法,TSA技術(shù)同樣采多聚HRP的二抗,同樣有對應(yīng)的“顯色”步驟,HRP催化加入反應(yīng)體系的酪胺熒光素底物,產(chǎn)生活化熒光底物,活化底物可與抗原上的酪氨酸等殘基共價結(jié)合,使樣品上穩(wěn)定的共價結(jié)合酪胺熒光素。之后用熱修復(fù)法洗去非共價結(jié)合的一抗-二抗-HRP復(fù)合物,重復(fù)下一種一抗-HRP二抗來第二輪孵育,換另一種酪胺熒光素底物,如此往復(fù)就可實現(xiàn)多重標(biāo)記。

        

實驗步驟

實驗案例

        【技術(shù)特點】

        由于每次體系中都只有單一抗體孵育,因此無需擔(dān)心抗體交叉反應(yīng)以及一抗二抗種屬匹配問題,大大減少了實驗設(shè)計時不同種屬抗體選擇匹配的限制。也就是說,如果用TSA技術(shù),同一張片子上所有的靶標(biāo)都可以選用特異性高的兔單克隆抗體。搭配同一支抗兔的HRP二抗就可以進(jìn)行實驗。

        一、一鍵解決熒光多色染色中一抗來源的種屬限制問題。

        二、信號放大,熒光信號放大的倍數(shù)指數(shù)性增強。

        三、可以對多種蛋白在同一張切片上進(jìn)行不同熒光標(biāo)記,實現(xiàn)多種蛋白共定位。

  【注意事項】

        切片加入抗熒光猝滅劑后,4℃避光僅可保存1-2個月。

送檢與交付與標(biāo)準(zhǔn)

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