細(xì)胞周期檢測(cè)
體外培養(yǎng)細(xì)胞 生長(zhǎng)、分裂繁殖的能力，可用分裂指數(shù)來(lái)表示。它與生長(zhǎng)曲線有一定的聯(lián)系，如隨著分裂指數(shù)的不斷提高，細(xì)胞也就進(jìn)入了指數(shù)生長(zhǎng)期。分裂指數(shù)指細(xì)胞 群體中分裂細(xì)胞 所占的百分比，它是測(cè)定細(xì)胞 周期的一個(gè)重要指標(biāo)，也是不同實(shí)驗(yàn)研究選擇細(xì)胞的重要依據(jù)。
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實(shí)驗(yàn)介紹
【技術(shù)原理】
流式利用不同熒光物質(zhì)標(biāo)記的單克隆抗體，與待測(cè)成分作用，然后上流式細(xì)胞儀檢測(cè)待測(cè)細(xì)胞。待測(cè)細(xì)胞隨流動(dòng)室內(nèi)的流動(dòng)鞘液排列成單列，一個(gè)個(gè)迅速通過(guò)激光聚焦區(qū)，激光在對(duì)每個(gè)細(xì)胞進(jìn)行照射時(shí)可同時(shí)得到前向角散射和側(cè)向角散射2種散射光以及激發(fā)熒光標(biāo)記物發(fā)出的信號(hào)，利用這些信號(hào)，可計(jì)算出相對(duì)含量，從而得到細(xì)胞群的相對(duì)比值。
細(xì)胞周期分為間期與分裂期兩個(gè)階段。間期又分為三期：即DNA合成前期（G1期）、DNA合成期（S期）與DNA合成后期（G2期）。某些細(xì)胞在分裂結(jié)束后暫時(shí)離開(kāi)細(xì)胞周期，停止細(xì)胞分裂，執(zhí)行一定生物學(xué)功能（G0期）。由于細(xì)胞周期各時(shí)相的DNA含量不同，通常正常細(xì)胞的G1/ G0期具有二倍體細(xì)胞的DNA含量（2N），而G2/ M期具有四倍體細(xì)胞的DNA含量（4N），而S期的DNA含量介于二倍體和四倍體之間。PI可以與DNA結(jié)合，其熒光強(qiáng)度直接反映了細(xì)胞內(nèi)DNA含量。因此，通過(guò)流式細(xì)胞儀PI染色法對(duì)細(xì)胞內(nèi)DNA含量進(jìn)行檢測(cè)時(shí)，可以將細(xì)胞周期各時(shí)相區(qū)分為G1/G0期，S期和G2/M期。
【實(shí)驗(yàn)方法】
Step1：細(xì)胞培養(yǎng)
Step2：轉(zhuǎn)染或藥物處理
Step3：細(xì)胞收集
Step4：加周期試劑
Step5：上機(jī)檢測(cè)
案例展示
在施加藥物后，細(xì)胞周期明顯阻滯。
技術(shù)總結(jié)
1、考慮到進(jìn)行流式時(shí)需要用到對(duì)照組細(xì)胞設(shè)置空白組（用于調(diào)節(jié)電壓）和單染組細(xì)胞（用于調(diào)節(jié)補(bǔ)償），因此要求該組細(xì)胞量較其他組多；
2、如發(fā)現(xiàn)細(xì)胞密度偏低，細(xì)胞量較少，則適當(dāng)增加離心時(shí)間。收集細(xì)胞時(shí)，應(yīng)該連同上清一起收集，同時(shí)胰酶消化時(shí)間不宜過(guò)長(zhǎng)，否則容易引起假陽(yáng)性；
3、檢測(cè)細(xì)胞經(jīng)過(guò)轉(zhuǎn)染等處理后可能會(huì)帶有自發(fā)熒光，應(yīng)注意選擇凋亡試劑盒的顏色通道 如：帶綠色熒光時(shí)，應(yīng)選擇7AAD試劑盒；
4、細(xì)胞鋪板應(yīng)選擇細(xì)胞狀態(tài)良好的時(shí)候進(jìn)行，且避免因反復(fù)吹打形成機(jī)械損傷，而出現(xiàn)細(xì)胞碎片過(guò)多。
送檢與交付標(biāo)準(zhǔn)
| 樣品類型 | 樣品需求 | 運(yùn)輸條件 |
|---|---|---|
| 組織 | 離體后組織制成單細(xì)胞懸液，加入PBS培養(yǎng)基內(nèi) | 常溫運(yùn)輸 |
| 活細(xì)胞 | 樣本量：1*106個(gè)細(xì)胞/TEST，加入PBS培養(yǎng)基內(nèi) | 常溫運(yùn)輸 |
| 血液 | 將血液采集在EDTA肝素鈉的抗凝采血管內(nèi) | 常溫運(yùn)輸 |
電話：400-691-6686
在線時(shí)間：8:00-24:00
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